NGHIÊN CỨU CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN SỰ THU NHẬN CHẾ PHẨM PROTEASE NGOẠI BÀO CỦA Bacillus amyloliquefacien N1
Abstract
Một số điều kiện ảnh hưởng đến khả năng thu nhận chế phẩm protease ngoại bào của chủng B. amyloliquefaciens N1, phân lập từ nem chua Huế, như thành phần môi trường, nhiệt độ nuôi cấy, pH ban đầu và thời gian lên men đã được nghiên cứu. Kết quả cho thấy rằng tinh bột hòa tan là nguồn carbon bổ sung vào môi trường cơ bản (MTCB), có chứa 1% petone, 0,3% cao thịt và 0,5% NaCl, làm cho quá trình thu nhận chế phẩm protease ngoại bào của B. amyloliquefaciens N1 tốt nhất; hoạt độ protease trong môi trường nuôi cấy đạt được 0,758 HP/ml, lớn hơn so với mẫu đối chứng (0,613 HP/ml) 1,2 lần. Trong tất cả các nguồn nitơ bổ sung vào MTCB, chỉ có casein làm cho hoạt độ protease (0,758 HP/ml) cao hơn mẫu đối chứng (0,511 HP/ml). Các thí nghiệm có bổ sung kết hợp các nguồn nitơ và carbon vào môi trường nuôi cấy, hoạt độ protease không tăng so với khi khảo sát ảnh hưởng riêng rẽ nguồn tinh bột. Trên cơ sở khảo sát ảnh hưởng của hàm lượng tinh bột (0,25%-1,75%) đến khả năng sinh tổng hợp protease của chủng này, hoạt độ quan sát đạt được giá trị cao nhất (0,760 HP/ml) ở hàm lượng tinh bột 0,75%. Môi trường nuôi cấy có thành phần thích hợp cho quá trình thu nhận chế phẩm protease ngoại bào B. Amyloliquefaciens N1 được gọi là môi trường thích hợp (MTTH). Nuôi cấy Bacillus amyloliquefaciens N1 trong MTTH, hoạt độ protease đạt cao nhất ở pH ban đầu bằng 8 và nhiệt độ 35oC. Thời gian thu nhận enzyme thích hợp nhất khi nuôi cấy chủng này trong các điều kiện trên là 32 giờ với hoạt độ đạt được là 0,777 HP/ml.References
Lê Gia Hy, Lỗ Tiến Sỹ, Phạm Kim Dung, Trương Nam Hải, Nghiên cứu sản xuất protease kiềm từ chủng xạ khuẩn ưa kiềm CD 2-1 phân lập ở Việt Nam, Tạp chí Khoa học và Công nghệ, 3, (2000), 88-89.
Lê Đức Mạnh, Ngô Tiến Hiển, Lê Đức Ngọc, Nghiên cứu thu nhận và bảo quản protease từ chế phẩm lên men bề mặt của vi khuẩn Bacillus subtilis, Các công trình nghiên cứu ứng dụng công nghệ sinh học và công nghệ thực phẩm (Giai đoạn 1986-1995), Nxb. Khoa học và Kỹ thuật Hà Nội, 1995.
Đỗ Thị Bích Thủy, Trần Thị Xô, Nghiên cứu ảnh hưởng của một số yếu tố lên khả năng sinh protease của Bacillus subtilis, Tạp chí Nông nghiệp và phát triển nông thôn, 49, (2004), 1667-1668.
Deepak V, Kalishwaralal K, Ramkumarpandian S, Babu SV, Senthilkumar SR, Sangiliyandi G., Optimization of media composition for Nattokinase production by Bacillus subtilis using response surface methodology, Bioresour Technol 99 (17): (2008), 8170-8174.
Gajju H, Bhalla, Agarwal T C, Thermostable alkaline proteinase from thermophilic Bacillus coagulants PB-77. Ind. J. Microbiol., 36, (1996), 153-155.
Ghafoor A, Shahida H., Production dynamics Bacillus subtilis strains AG-1 and EAG-2, producing an extracellular alkaline protease. Afr J of Microbiol Res, 3 (5), (2009), 258-263.
Gerritse SB, Shiva RR, Lokeswari N and Raja J., Optimization of Protease Production from Aspergillus oryzae Sp. using Box-Behnken Experimental Design, E-Journal of Chemistry, 4(2), (2007), 145-153.
Gessesse A, Hatti-Kaul R, Gashe B A, Mattiasson B., Novel alkaline proteinases from alkaliphilic bacteria grown on chicken feather, Enzyme and Microbial Technology, 32, (2002), 519-524.
Joo HS, Kumar CG, Park GC, Kim KT, Paik SR, Chang Cs., Optimization of the production of an extracellular alkaline proteinase from Bacillus horikoshi, Process Biochem, 38, (2002), 155-159.
Kim J M, Lim W J, Suh H J., Feather-degrading Bacillus species from poutry waste, Process Biochemistry, 37, (2001), 287-291.
Mehrotra S, Pandey P K, Gaur R, Darmwa N S., The production of alkaline proteinase by Bacillus species isolate, Bioresource Technology, 67, (1999), 201-203.
Mussarat S, Aamer AS, Abdul H, Fariha H., Influence of culture condition on production and activity of protease from Bacillus subtilis BS1, Parkistan J of Microbiol, 40 (5), (2008), 2161-2169.
Rai SK, Ashis KM., Statistical optimization of production, purification and industrial application of a laundry detergent and organic solvent-stable subtilisin-like serine protease (Alzwiprase) from Bacillus subtilis DM-04. Biochem Eng J, 48 (2), (2010), 173-180.
Robert S, Geetha A & Arulpandi I., Optimization of protease and lipase production by Bacillus pumilus SG2 isolated from an industrial effluent, The Internet Journal of Microbiology, 5(2), (2008), 2161-2169.
Sangeetha M, Pandey PK, Gaur R, Darmwal NS., The production of alkaline proteinase by Bacillus species isolated, Bioresoure Technology, 67, (1999), 201-203.
Sangeetha M, Pandey PK, Gaur R, Darmwal NS., The production of alkaline proteinase by Bacillus species isolated, Bioresoure Technology, 67, (1999), 201-203.
Sivasubramanian S, Manohar BS, Puvanakrishnan R., Mechanism of enzymatic dehairing of skins using a bacterial alkaline protease, Chemosphere, 70 (6), (2008), 1025-1034.
Sung JH, Sang JA, Na YK, Soo KJ, Joong KK, Joon KC, Hyung HL., Purification, molecular cloning, and biochemical characterization of subtilisin JB1 from a newly isolated Bacillus subtilis JB1, Appl Biochem Biotechnol, 162 (3), (2009), 900-911.
Wang CT, Baoping J, Bo L, Hong J, Long FC., Purification and characterization of a fibrinolytic enzyme of Bacillus subtilis DC33, isolated from Chinese traditional douchi, J Ind Microbiol Biotechnol, 33 (9), (2006), 750-758.
Wang SH, Cheng Z, Yan LY, Miao D, Ming FB., Screening of a high fibrinolytic enzyme producing strain and characterization of the fibrinolytic enzyme produced from Bacillus subtilis LD-8547, World J Microbiol Biotechnol, 24, (2008), 475-482.
Wellingta CAN, Meire LLM., Production and properties of an extracellular protease from thermophilic Bacillus sp., Brazilian J of Microbiol, 35, (2004), 91-96.
Yong JK, Kim JH, Gal SW, Kim JE, Park SS, Chung KT, Kim YH, Kim BW, Joo WH., Molecular cloning and characterization of the gene encoding a fibrinolytic enzyme from Bacillus subtilis strain A1, World J of Microbiol and Biotechnol, 20, (2003), 711-717.
